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    液氮超低溫保藏法是菌種長期保藏的最有效最可靠的方法

    時間:2019-06-05 10:55來源:未知 作者:班德液氮罐 點擊:
    怎么樣利用液氮保藏菌種?自增壓液氮罐

    液超低溫保藏法是把菌種裝在含有冷凍保護劑的安瓶瓶內,將該安瓶瓶放人液氮(-196℃)中保藏。由于菌絲體處于-196℃,其代謝降低到完全停止的狀態。

    所以不需定期移植。

    液氮超低溫保藏法是菌種長期保藏的最有效最可靠的方法。

    具體操作如下:   

    (1)菌種制備  菌種在PDA培養基平板上于22-24℃下培養10-15天,菌絲體充分生長后,用打孔器(直徑2-4毫米)切割瓊脂塊,或用手術刀片把菌絲培養物切成2毫米X4毫米長方形小塊。

    (2)安瓶管制備  安瓶管的玻璃,要能經受溫度突變而不破裂,容易用火焰熔封管口,恢復培養時容易打開。一般采用硼硅玻璃,管的大小根據需要而定,通常是75毫米X 10毫米或能容1.2毫升液體的安瓶瓶比較合適。
    選好安瓶管后,用印油書寫欲保藏的食用菌菌種的菌號于管壁上,160℃干熱滅菌,使印記牢固地固定在管壁上。   

    (3)保護劑  每管加進0.8毫升高壓滅菌的10%的甘油水溶液或10%二甲亞諷水溶液可作為冷凍保護劑。
    用無菌鑷子將這種帶有菌絲體的瓊脂塊移人加有保護劑的安瓶管中。用火焰將安瓶管上部熔封,浸在水中檢查有無漏氣。

    (4)液氮保藏把已做好的安瓶菌種管放人具有孔洞的小塑料瓶中(在塑料瓶的底部放一塊鐵片,使塑料瓶連同安瓶管能一起沉人液氮罐中),蓋好瓶蓋,在瓶蓋上連接一條細繩并作記號,以便提出所需的菌種。把裝有安瓶管的塑料瓶吊在液氮罐口上,使安瓶管緩慢地降溫,大約30分鐘后,把安瓶管浸人液氮中進行長期保存。

    啟用液氮罐中保存的菌種時,應先將安瓶瓶置于35-40℃的溫水中,使瓶內的冰塊迅速融解,然后在無菌條件下開啟安瓶瓶,用接種針取菌塊移接于適宜的培養基上,置22-24℃活化培養。自增壓液氮罐

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